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            BV2細胞異常生長形態解析及解決方案

            發布時間: 2022-01-06  點擊次數: 3643次

            BV2

            常用的小膠質細胞模型,它用攜帶v-raf/v-myc基因的逆轉錄病毒(J2)感染原代小膠質細胞而獲得永生化。BV2細胞表達非特異性酯酶活性,它具有吞噬性能力,并缺乏過氧化物酶活性。這種細胞不僅會分泌溶菌酶,在適當的刺激下,還會分泌白細胞介素1和腫瘤壞死因子。


            此外,BV2細胞還表現出自發的抗念珠菌活性,用干擾素-Y處理后獲得殺腫瘤活性。



            從表型上看,BV2細胞對MAC1和MAC2抗原呈陽性,而對MAC3、膠質纖維酸性蛋白(GFAP)和半乳糖核苷(GC)抗原呈陰性[1]。

            圖片

            圖A. BV2細胞顯微照片,bar=30 μm.

            圖B. 通過掃描電鏡觀察,在玻璃蓋板上培養的BV2細胞,bar=5 μm.

            圖C. 通過透射電鏡觀察,BV2細胞的部分細胞質吞噬iCA,bar=3 μm.

            (圖片引用自文獻[1]


            在培養BV2細胞的時候,同學們最常遇到的問題就是生長形態異常。生長形態異常往往伴隨著細胞生長緩慢、細胞死亡等,導致實驗做不出結果,給大家帶來重重困擾。


            小普根據多年的實驗經驗,為大家整理了這一現象可能發生的原因,及相應解決方案。


            首先我們來看看正常的BV2形態。結合眾多文獻和Procell的細胞圖片來看,BV2是一種半貼壁半懸浮細胞,它的形態并不規則,存在圓形和梭形兩種。


            懸浮細胞為圓形,貼壁細胞既有圓形也有梭形。由于圓形細胞折光率高,它的邊緣看起來是發亮的;梭形細胞則向兩端伸出黑色突起。

            圖片

            (圖片源自Procell)


            那么,異常生長的BV2細胞有哪些形態呢?


            如何根據不同的異常生長形態,調整改善培養條件,及時解決問題?


            小普總結如下:


            圖片

            形態1:細胞全部飄起,*不貼壁

            解析:分為培養基偏堿及復蘇后不貼壁兩種情況。

            (1)培養基偏堿。培養瓶不透氣或者開封時間過長,培養基PH將增大,可見培養基呈紫紅色。BV2對培養基酸堿度較為敏感,在偏堿培養基中培養數小時后將會全部飄起。

            解決方案:給細胞上新鮮配制的培養基,并使用透氣瓶。

            (2)復蘇后不貼壁。需要檢查凍存或復蘇操作過程,以及培養基是否存在問題。

            解決方案:確保凍存前狀態良好及凍存復蘇操作規范,使用新鮮配制的培養基,即可解決問題。


            圖片

            形態2:細胞形態變為阿米巴樣

            解析:小膠質細胞是一種可塑性*的細胞,可通過特定因素激活,從而發揮其免疫功能。從靜息態變為激活態的過程中,小膠質細胞形態也隨之發生改變。


            實驗中常用細菌脂多糖(LPS)和干擾素-γ(IFNγ),分別模擬細菌和病毒感染,來刺激小膠質細胞激活。受到刺激的小膠質細胞突起縮短變厚,胞體增大,呈現阿米巴樣(如下圖所示)。


            但有的時候BV2形態變化并不明顯,還需要結合其他實驗,如檢測NO、IL-13等炎癥因子的表達,來確定BV2是否被定向激活。

            圖片

            (圖片引用自文獻[2]


            如果細胞沒有受到任何刺激,就已經呈現阿米巴樣,或者受刺激后,炎癥因子表達沒有差異,那么細胞有可能發生了自分化。


            其原因可以從以下幾點考慮:

            (1)存在潛在微生物污染,刺激細胞自分化。

            解決方案:通過去掉培養基中的抗生素確定污染類型,并排查污染源頭。

            (2)使用的胎牛血清內毒素高,內毒素刺激細胞自分化。

            解決方案:嘗試使用超低內毒素胎牛血清,或許能得到改善。


            圖片

            形態3:全都是分枝狀細胞,圓形細胞少

            解析:這種形態往往伴隨著細胞生長慢或生長停滯的情況。由于圓形細胞增殖速度較快,在圓形細胞缺失的狀況下,整體增殖速度就會減慢。

            解決方案:由于BV2是一種半貼壁半懸浮細胞,貼壁和懸浮細胞的比例并不固定,當懸浮細胞較多時,換液和傳代時要將懸浮細胞收集,避免圓形細胞的大量損失。


            總而言之,BV2細胞的形態、生長狀態與其生長環境息息相關,給細胞以最合適的環境,嚴格按照要求規范操作,細胞也將用好的狀態回報你。


            參考文獻:

            [1] PubMed=2110186; DOI=10.1016/0165-5728(90)90073-V.

            Blasi E., Barluzzi R., Bocchini V., Mazzolla R., Bistoni F.

            Immortalization of murine microglial cells by a v-raf/v-myc carrying retrovirus.

            J. Neuroimmunol. 27:229-237(1990)

            [2] PMID=31590042 ; DOI=10.1016/j.molimm.2019.09.020.

            Zhang J, Zheng Y, Luo Y, Du Y, Zhang X, Fu J.

            Curcumin inhibits LPS-induced neuroinflammation by promoting microglial M2 polarization via TREM2/ TLR4/ NF-κB pathways in BV2 cells. 



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